图片名称

非洲猪瘟检测试剂

【名称】通用名: 非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂

 

1

 

【规格】 50T/盒

【贮存与有效期】 -20℃避光保存12个月。

【主要成分与含量】

 

组份

规格

荧光PCR反应液

250μl/管×5 管

阴性对照

150μl/管×1 管

阳性对照

150μl/管×1 管

说明书

1份

 

【作用与用途】 用于全血、血清、淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体、肺、肌肉、环境等样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

 

【用法与判定】

一、用法

1、PCR试剂分装(在试剂准备区进行)

2、将PCR反应液复溶,混匀后瞬时离心。

3、将PCR反应液按25μl/管分装至PCR反应管中(分装数量:待测样本数+1阳性对照+1阴性对照)。

4、用带滤芯的吸头分别吸取已处理好的样本、阴性对照、阳性对照各3μl分别加到装有PCR反应液的反应管中,盖紧管盖,瞬时离心。

5、PCR扩增检测(在扩增检测区进行),将PCR管放入PCR仪。

循环参数设定(根据实际情况选择循环参数)

 

循环数

温度

时间

荧光信号采集位点

1

95℃

5 分钟

40

95℃

10 秒

60℃

30秒

荧光信号采集

 

95℃预变性 5 分钟;95℃变性10 秒,60℃退火延伸30秒,40个循环, 在每一循环的 60℃时收集FAM荧光信号。

 

二、结果判定

1、阳性对照的Ct值应<35且出现特异性扩增曲线,阴性对照应无Ct值或Ct值≥40 且无特异性扩增曲线,试验结果有效;否则应重新进行试验。

2、被检样本Ct值<40且出现特异性扩增曲线,判为阳性;当无Ct值或Ct值≥40,且无扩增曲线判为阴性。

 

【注意事项】

1、所有实验过程应遵守农业农村部关于非洲猪瘟病毒检测相关的规定。

2、反应体系应在特定配液区中配制,整个实验过程严格控制污染。

3、PCR整个试验分试剂准备区、样品处理区、扩增检测区。流程顺序为试剂准备区→样品处理区→扩增检测区

 

严禁器材和试剂倒流。

4、反复冻融试剂将减低检测灵敏度,本试剂盒建议反复冻融不超过5次。

5、-20℃保存的各试剂管使用前应在室温下完全融化,液体融化后需彻底混匀,2000rpm离心15s,使用后立即放回-20℃。

6、在DNA提取过程中,避免核酸酶污染,尽量缩短操作时间。

7、注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂。

8、PCR反应管避免气泡存在,管盖需盖紧。

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