
非洲猪瘟检测试剂
【名称】通用名: 非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂
【规格】 50T/盒
【贮存与有效期】 -20℃避光保存12个月。
【主要成分与含量】
组份 |
规格 |
荧光PCR反应液 |
250μl/管×5 管 |
阴性对照 |
150μl/管×1 管 |
阳性对照 |
150μl/管×1 管 |
说明书 |
1份 |
【作用与用途】 用于全血、血清、淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体、肺、肌肉、环境等样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。
【用法与判定】
一、用法
1、PCR试剂分装(在试剂准备区进行)
2、将PCR反应液复溶,混匀后瞬时离心。
3、将PCR反应液按25μl/管分装至PCR反应管中(分装数量:待测样本数+1阳性对照+1阴性对照)。
4、用带滤芯的吸头分别吸取已处理好的样本、阴性对照、阳性对照各3μl分别加到装有PCR反应液的反应管中,盖紧管盖,瞬时离心。
5、PCR扩增检测(在扩增检测区进行),将PCR管放入PCR仪。
循环参数设定(根据实际情况选择循环参数)
循环数 |
温度 |
时间 |
荧光信号采集位点 |
1 |
95℃ |
5 分钟 |
— |
40 |
95℃ |
10 秒 |
— |
60℃ |
30秒 |
荧光信号采集 |
95℃预变性 5 分钟;95℃变性10 秒,60℃退火延伸30秒,40个循环, 在每一循环的 60℃时收集FAM荧光信号。
二、结果判定
1、阳性对照的Ct值应<35且出现特异性扩增曲线,阴性对照应无Ct值或Ct值≥40 且无特异性扩增曲线,试验结果有效;否则应重新进行试验。
2、被检样本Ct值<40且出现特异性扩增曲线,判为阳性;当无Ct值或Ct值≥40,且无扩增曲线判为阴性。
【注意事项】
1、所有实验过程应遵守农业农村部关于非洲猪瘟病毒检测相关的规定。
2、反应体系应在特定配液区中配制,整个实验过程严格控制污染。
3、PCR整个试验分试剂准备区、样品处理区、扩增检测区。流程顺序为试剂准备区→样品处理区→扩增检测区
严禁器材和试剂倒流。
4、反复冻融试剂将减低检测灵敏度,本试剂盒建议反复冻融不超过5次。
5、-20℃保存的各试剂管使用前应在室温下完全融化,液体融化后需彻底混匀,2000rpm离心15s,使用后立即放回-20℃。
6、在DNA提取过程中,避免核酸酶污染,尽量缩短操作时间。
7、注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂。
8、PCR反应管避免气泡存在,管盖需盖紧。

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